شماره کاتالوگ
TA-822.25
TA-822.50
TA-822.100
حیطه کاربرد
محصول Trita® α-thalassemia InDel Diagnostic Kit جهت شناسایی حذف های α3.7– ، -α4.2 ، -α20.5 ،–MED و پدیده α-triplication در کلاستر ژنی آلفا گلوبین انسانی که منجر به بروز بیماری تالاسمی آلفا می شود طراحی و تولید شده است. اساس عملکرد این محصول، روش نوین Multiplex Fluorescent PCR و کپیلاری الکتروفورز میباشد و با استفاده از DNA تخلیص شده از خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد، امکان تشخیص آلفا تالاسمی را فراهم میسازد.
اساس عملکرد محصول
محصول Trita® α-thalassemia InDel Diagnostic Kit به منظور شناسایی حذفها و مضاعفشدگی در کلاستر ژنی آلفا-گلوبین انسانی (بازوی کوتاه کروموزوم 16) شامل حذف های α3.7– ، -α4.2 ، -α20.5 ،–MED و پدیده α-triplication که منجر به بروز بیماری ژنتیکی آلفا تالاسمی میشود، طراحی و تولید شده است. نمونه بیولوژیک مورد نیاز جهت استفاده از این کیت، خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد میباشد. اساس عملکرد این محصول، روش مولکولی Multiplex Fluorescent PCR میباشد. در این محصول، جهت شناسایی هر یک از حذفها و مضاعف شدگیهای نامبرده، دو مارکر ژنتیکی (Double check) با استفاده از پرایمرها و پروبهای اختصاصی نشاندار شده با رنگ فلورسنت، مورد ارزیابی قرار میگیرند. تعداد مارکرهای ژنتیکی مورد بررسی به گونهای انتخاب شده است که تشخیص دقیق حذفهای ژنتیکی مرتبط با آلفا تالاسمی را امکان پذیر میسازد. روش عملکرد این کیت از نظر زمان، کارایی و هزینه بسیار مناسب، سریع و مقرون به صرفه است. همچنین، در این کیت، انتخاب نواحی ژنی و طراحی پرایمرها و پروبها به صورت کاملا اختصاصی و با توجه به عدم وجود پلیمورفیسم در ناحیه اتصال پروبها روی ژنوم انجام گرفته است.
در محصول Trita® α-Thalassemia InDel Diagnostic Kit مجموعاً 15 مارکر مورد بررسی قرار میگیرند و پروبها و پرایمرهای این محصول با رنگ فلورسنت (F6-FAMTM) نشاندار شدهاند. در واکنش مولکولی PCR، پروبها و پرایمرهای فلورسنت به طور اختصاصی نواحی ژنی موردنظر از ژن آلفا-گلوبین انسانی را در یک واکنش Multiplex تکثیر نموده و سپس محصول واکنش PCR با یک ران Capillary electrophoresis با دستگاه ژنتیک آنالایزر قابل شناسایی میباشد. به دلیل تک رنگ بودن محصول، نیاز به ماتریکس کالیبراسیون دستگاه ژنتیک آنالایزر نمیباشد. آنالیز و تفسیر نتایج نهایی با نرم افزار ®GeneMarker انجام میگیرد. به طور کلی، اساس عملکرد این محصول در تشخیص بیماری آلفا تالاسمی شامل 4 مرحله اصلی زیر میباشد که هر مرحله به شرح زیر صحه گذاری شده است که عبارتند از:
1. استخراج DNA از نمونه بیولوژیک
این محصول با نمونههای خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد، صحهگذاری شده است. همچنین، این محصول با کیت های استخراج DNA به روش ستونی مانند کیت QIAamp® DNA Blood Mini Kit محصول شرکت Qiagen آلمان سازگار است. علاوه بر این، روشهای استخراج DNA رسوبی نیز کاربردی است.
2. واکنش مولکولی Multiplex Fluorescent PCR است که شامل مراحل زیر است:
- دناتوراسیون (Denaturation)
- هیبریداسیون پروبها (Probe Hybridization)
- تکثیر مارکرهای ژنی موردنظر به روش PCR (PCR Amplification)
این محصول با دستگاه ترموسایکلر Applied Biosystem (Veriti) و BioRad (T 100) بهینه سازی شده است.
3. شناسایی قطعات تکثیر شده (Fragment Separation)
جداسازی قطعات تکثیر شده (Fragment Seperation) به روش Capillary Electrophoresis با دستگاه Genetic Analyzer مدلهای(xL) ABI 3130 و ABI 3500 (xL) صحه گذاری شده است که با کپیلاری در سایزهای 30، 50 یا 80 سانتی متر سازگار میباشد.
4. آنالیز قطعات تکثیر شده (Fragment Analysis)
آنالیز و تفسیر نتایج (Data Analysis) با استفاده از نرم افزار ®GeneMarker بر اساس پنل کیت آلفا تالاسمی (که توسط شرکت برای کاربران ارسال میشود) امکان پذیر است.
محتویات Trita® α-thalassemia InDel Diagnostic Kit
محصول Trita® α-thalassemia InDel Diagnostic Kit در سه مدل 25، 50 و 100 تستی قابل ارائه است. جدول زیر نشان دهندهی اجزای کیت و مقادیر هر یک از آنها در مدلهای مختلف این محصول میباشد.
| The composition of Trita® α-thalassemia InDel Diagnostic Kit | ||||
| Tube/Cap Color | Vol. for 100 rxn (μl) | Vol. for 50 rxn (μl) | Vol. for 25 rxn (μl) | Kit Content |
| Amber/Yellow | 4 × 55 | 2 × 55 | 55 | SOLα-1 |
| Clear/Red | 4 × 375 | 2 × 375 | 375 | SOLα-2 |
| Clear/ Clear | 4 × 70 | 2 × 70 | 70 | SOLα-3 |
|
* The kit contains a user’s Manual inside the package. |
||||
ویژگی های فنی
در جدول زیر مهم ترین ویژگی های فنی محصول Trita® α-thalassemia InDel Diagnostic Kit به طور خلاصه ارائه شده است:
| Technical specification of Trita® α-Thalassemia InDel Diagnostic Kit | |
| Kit Specifications and characteristics | Parameters |
| Multiplex Fluorescent PCR | Technique |
| Capillary electrophoresis | Detection Method |
| Semi-quantitative | Type of Analysis |
| Detection of α-thalassemia-associated
genetic deletions (α3.7– ، -α4.2 ، —MED ، -α20.5) & α-triplication |
Target Sequence |
| DNA extracted from peripheral blood (adults & newborns) | Validated Specimen |
|
-20 ± 5 °C |
Storage |
| Mono-color (6-FAMTM) | Dye |
| QIAamp® DSP DNA Blood Mini Kit (Cat No. 61104- Qiagen, Germany) | Validated Extraction Method |
| BioRad (T 100), Applied Biosystem (Veriti), GeneAmp PCR System 9700 (Ramping rates: heating 0.8 ̊C/s, cooling 1.6 ̊C/s) |
Validated thermocyclers |
| Applied Biosystems™ 3130/3130 xL Genetic Analyzer Applied Biosystems™ 3500/3500 xL Genetic Analyzer |
Validated Genetic analyzers |
| 560 SIZER ORANGE (Devyser-Sweden) GeneScan™ 500 LIZ® Size Standard (Life Technologies-USA) GeneScan™ 600 LIZ® Size Standard (Life Technologies-USA) |
Size standard |
| ®GeneMarker | Validated Softwares |
