شماره کاتالوگ
FT-324.25
FT-324.50
FT-324.100
حیطه کاربرد
محصول Trita® AML-FLT3 Mutation Assay Kit جهت شناسایی جهش Internal Tandem Duplication (ITD) در ژن FLT3 طراحی و تولید شده است. اساس عملکرد محصول، روش مولکولیMultiple Fluorescent PCR و کپیلاری الکتروفورز با استفاده از نمونه DNA استخراج شده از نمونه خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد مشکوک یا مبتلا به بیماری Acute Myelogenous Leukemia (AML) می باشد. این محصول در آزمایشگاه‌های تشخیص ژنتیک و پاتوبیولوژی کاربرد دارد.
اساس عملکرد محصول
محصول Trita® AML-FLT3 Mutation Assay Kit به منظور شناسایی جهش Internal Tandem Duplication (ITD) در ژن FLT3 در افراد مشکوک یا مبتلا به بیماری AML طراحی و تولید شده است. نمونه بیولوژیک مورد نیاز جهت استفاده از این کیت، DNA استخراج شده از خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد مشکوک یا مبتلا به AML می باشد. اساس عملکرد این محصول، روش مولکولی PCR/CE با استفاده از پرایمرهای نشان دار شده می باشد. همچنین در این کیت، انتخاب نواحی ژنی و طراحی پرایمرها به صورت کاملا اختصاصی و با توجه به عدم وجود پلی‌مورفیسم در ناحیه اتصال پرایمرها روی ژنوم انجام گرفته است.
در محصول Trita® AML-FLT3 Mutation Assay Kit مجموعا سه ناحیه مورد بررسی قرار می گیرند و پرایمر های این محصول با رنگ فلورسنت 6-FAMTM نشان دار شده اند. پرایمرهای فلورسنت به طور اختصاصی جهش Internal Tandem Duplication (ITD) در ژن FLT3 را در واکنش Fluorescent PCR به صورت همزمان (Multiples) تکثیر می کنند. پس از انجام واکنش پلیمرازی، محصول PCR با یک ران Capillary electrophoresis در دستگاه ژنتیک آنالایزر قابل خوانش و شناسایی می باشد. به دلیل تک رنگ بودن محصول، نیاز به ماتریکس کالیبراسیون دستگاه ژنتیک آنالایزر نمی باشد. آنالیز و تفسیر نهایی با نرم افزار GeneMarker® انجام می گیرد. به طور کلی، اساس عملکرد این محصول در تشخیص جهش های ژن FLT3 شامل سه3 مرحله اصلی زیر می باشد که هر مرحله به شرح زیر صحه گذاری شده است که عبارتند از:
-
استخراج DNA از نمونه بیولوژیک
این محصول با نمونه های خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد مشکوک یا مبتلا به AML صحه گذاری شده است. این محصول با کیت های استخراج DNA مانند کیت QIAamp® DSP DNA Blood Mini Kit محصول شرکت Qiagen آلمان برای نمونه های خون بهینه سازی شده است.
-
واکنش ملکولی Fluorescent PCR بر اساس پرایمرهای نشان دار شده که شامل مراحل زیر است:
- دناتوراسیون (Denaturation)
- هیبریداسیون پرایمرها (Primer Hybridization)
- تکثیر مارکر های ژنی مورد نظر به روش PCR (PCR Amplification)
این محصول با دستگاه ترموسایکلر Applied Biosystem (Veriti)، BioRad (T 100) بهینه سازی شده است.
-
آنالیز قطعات تکثیر شده (Fragment Analysis) که شامل مراحل زیر است:
- جداسازی قطعات تکثیر شده (Fragment Separation) به روش Capillary Electrophoresis
- آنالیز و تفسیر نتایج (Data Analysis) با استفاده از نرم افزار GeneMarker®
محصول PCR حاصل از این کیت با دستگاه Genetic Analyzer مدل های ABI 3130 (xL) و ABI 3500 (xL) با کپیلاری در سایزهای 30، 50 یا 80 سانتی متر سازگار می باشد. همچنین، آنالیز و تفسیر نتایج کپیلاری الکتروفورز با استفاده از نرم افزار GeneMarker® بر اساس پنل کیت (که توسط شرکت برای کاربران ارسال می شود) امکان پذیر است.
محتویات کیت
محصول Trita® AML-FLT3 Mutation Assay Kit با مدل های 25، 50 و 100 تستی قابل ارائه است. جدول زیر نشان دهنده اجزای کیت و مقادیر هریک از آنها در مدل های مختلف این محصول می باشد:
| Composition of Trita® AML-FLT3 Mutation Assay Kit | ||||
| Tube/Cap color | Vol. for 100 rxn (μl) | Vol. for 50 rxn (μl) | Vol. for 25 rxn (μl) | Kit Contents |
| Amber/Yellow | 4×125 | 2×125 | 125 | FT-1 |
| Amber/Green | 4×375 | 2×375 | 375 | FT-2 |
| * The kit contains a quick manual inside the package. | ||||
ویژگی های فنی
در جدول زیر مهم ترین ویژگی های فنی محصول Trita® AML-FLT3 Mutation Assay Kit به طور خلاصه ذکر شده است:
| Technical specification of Trita® AML-FLT3 Mutation Assay Kit | |
| Kit Specifications and characteristics | Parameters |
| Multiple Fluorescent PCR & Capillary Electrophoresis (PCR/CE) | Technique |
| Quantitative | Type of Analysis |
| Internal Tandem Duplications (ITD) in FLT3 gene | Target Sequence |
| Human peripheral blood or bone marrow aspirates | Validated Specimen |
| -20 ± 5 °C | Storage |
| 6-FAMTM | Dye |
| QIAamp® DSP DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Germany) | Validated Extraction Method |
| BioRad (T 100), Applied Biosystem (Veriti), GeneAmp PCR System 9700 (Ramping rates: heating 0.8 ̊C/s, cooling 1.6 ̊C/s) |
Validated thermocyclers |
| Applied Biosystems™ 3130/3130 xL Genetic Analyzer Applied Biosystems™ 3500/3500 xL Genetic Analyzer |
Validated Genetic analyzers |
| 560 SIZER ORANGE (Devyser-Sweden) GeneScan™ 500 LIZ® Size Standard (Life Technologies-USA) GeneScan™ 600 LIZ® Size Standard (Life Technologies-USA) |
Size standard |
| GeneMarker® | Validated Softwares |
