لگو سایت تریتاژن

کیت تشخیص بیماری لوسمی حاد میلوئیدی (Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit)

شماره کاتالوگ

NP-324.25

NP-324.50

NP-324.100

 

حیطه کاربرد

کیت تشخیصی Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit جهت شناسایی جهش‌های رایج فرم A (c.860-863dupTCTG )، فرم B (c.862-863insCATG) و فرم D (c.862-863insCCTG) و همچنین جهش‎های نادر فرم E، فرم G و  فرم H در ژن NPM1 طراحی و تولید شده است. اساس عملکرد محصول، روش مولکولی Multiplex Fluorescent PCR و کپیلاری‎الکتروفورز با استفاده از نمونه DNA استخراج شده از خون محیطی افراد بالغ یا نوزاد مشکوک یا مبتلا به Acute Myelogenous Leukemia (AML)  می‎باشد. این محصول در آزمایشگاه‎های تشخیص ژنتیک و پاتوبیولوژی کاربرد دارد.

 

اساس عملکرد محصول

محصول Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit به منظور شناسایی جهش‌های فرم A (c.860-863dupTCTG )، فرم B  (C.862-863insCATG) و فرم D  (C.862-863insCCTG) و همچنین جهش‎های نادر فرم E، فرم G و فرم H در ژن NPM1 در افراد مشکوک یا مبتلا به AML کاربرد دارد. نمونه بیولوژیک مورد نیاز جهت استفاده از این کیت، DNA  استخراج شده از خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد می‎باشد. اساس عملکرد این محصول، روش مولکولی PCR/CE با استفاده از پرایمرهای نشان‎دار شده می‎باشد. همچنین، در این کیت، انتخاب نواحی ژنی و طراحی پرایمرها به صورت کاملا اختصاصی و با توجه به عدم وجود پلی‎مورفیسم در ناحیه اتصال پرایمرها روی ژنوم انجام گرفته است.

در محصول Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit مجموعاً سه ناحیه مورد بررسی قرار می‎گیرند و پرایمرهای این محصول با رنگ فلورسنت  6-FAMTM نشان‎دار شده‎اند. پرایمرهای فلورسنت به طور اختصاصی جهش‌های فرم A (c.860-863dupTCTG )، فرم B (C.862-863insCATG) و فرم C (C.862-863insCCTG) را در یک واکنش Fluorescent PCR به صورت همزمان (Multiplex) تکثیر می‌کند. پس از انجام واکنش پلیمرازی، محصول PCR با یک ران Capillary electrophoresis در دستگاه ژنتیک آنالایزر قابل خوانش و شناسایی می‎باشد. به دلیل تک رنگ بودن محصول، نیاز به ماتریکس کالیبراسیون دستگاه ژنتیک آنالایزر نمی‎باشد. آنالیز و تفسیر نتایج نهایی با نرم افزار ®GeneMarker انجام می‎گیرد. به طور کلی، اساس عملکرد این محصول در تشخیص جهش‌های فوق در بیماران مشکوک یا مبتلا به AML شامل سه مرحله اصلی زیر می‎باشد که هر مرحله به شرح زیر صحه گذاری شده است که عبارتند از:

 

  1. استخراج DNA از نمونه بیولوژیک

این محصول با نمونه های خون محیطی (Peripheral blood) افراد بالغ یا نوزاد مشکوک یا مبتلا به AML صحه گذاری شده است. این محصول با کیت های استخراج DNA مانند کیت QIAamp® DSP DNA Blood Mini Kit محصول شرکت Qiagen آلمان برای نمونه های خون بهینه سازی شده است.

 

  1. واکنش ملکولی Fluorescent PCR بر اساس پرایمرهای نشان دار شده که شامل مراحل زیر است:

  • دناتوراسیون (Denaturation)
  • هیبریداسیون پرایمرها (Primer Hybridization)
  • تکثیر مارکر های ژنی مورد نظر به روش PCR (PCR Amplification)

این محصول با دستگاه ترموسایکلر Applied Biosystem (Veriti)، BioRad (T 100) بهینه سازی شده است.

 

  1. آنالیز قطعات تکثیر شده (Fragment Analysis) که شامل مراحل زیر است:

  • جداسازی قطعات تکثیر شده (Fragment Separation) به روش Capillary Electrophoresis
  • آنالیز و تفسیر نتایج (Data Analysis) با استفاده از نرم افزار ®GeneMarker

محصول PCR حاصل از این کیت با دستگاه Genetic Analyzer مدل های ABI 3130 (xL) و ABI 3500 (xL) با کپیلاری در سایزهای 30، 50 یا 80 سانتی متر سازگار می باشد. همچنین، آنالیز و تفسیر نتایج کپیلاری الکتروفورز با استفاده از نرم افزار ®GeneMarker بر اساس پنل کیت (که توسط شرکت برای کاربران ارسال می شود) امکان پذیر است.

 

محتویات کیت

محصول Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit با مدل های 25، 50 و 100 تستی قابل ارائه است. جدول زیر نشان دهنده اجزای کیت و مقادیر هریک از آنها در مدل های مختلف این محصول می باشد:

Composition of Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit
Tube/Cap color Vol. for 100 rxn (μl) Vol. for 50 rxn (μl) Vol. for 25 rxn (μl) Kit Contents
Amber/Yellow 4×125 2×125 125 NP-1
Amber/Green 4×375 2×375 375 NP-2

* The kit contains a quick manual inside the package.

 

 

ویژگی های فنی

در جدول زیر مهم ترین ویژگی های فنی محصول Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit به طور خلاصه ذکر شده است:

Technical specification of Trita® AML-NPM1 Mutation Assay Kit
Kit Specifications and characteristics Parameters
Multiple Fluorescent PCR & Capillary Electrophoresis (PCR/CE) Technique
Quantitative Type of Analysis
NPM1 gene main mutations including Type A (c.860-863dupTCTG), Type B (c.862_863insCATG) & Type D (c.862-863insCCTG)

And NPM1 rare mutations including Type E, Type G & Type H

Target Sequence
Human peripheral blood Validated Specimen

-20 ± 5 °C

Storage

 6-FAMTM

Dye
QIAamp® DSP DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Germany) Validated Extraction Method
BioRad (T 100), Applied Biosystem (Veriti), GeneAmp PCR System 9700
(Ramping rates: heating 0.8 ̊C/s, cooling 1.6 ̊C/s)
Validated thermocyclers
Applied Biosystems™ 3130/3130 xL Genetic Analyzer
Applied Biosystems™ 3500/3500 xL Genetic Analyzer
Validated Genetic analyzers
560 SIZER ORANGE (Devyser-Sweden)
GeneScan™ 500 LIZ® Size Standard (Life Technologies-USA)
GeneScan™ 600 LIZ® Size Standard (Life Technologies-USA)
Size standard
®GeneMarker Validated Softwares

 

 

منابع: