Trita® UGT1A1 Genotyping Kit

حیطه کاربرد

محصول Trita® UGT1A1 Genotyping Kit جهت ژنوتایپینگ و تعیین تعداد تکرارهای TA در TATA box پروموتر ژن UGT1A1 طراحی و تولید شده است. این محصول قادر به شناسایی تعداد ۴ الی ۹ تکرار از توالی TA در TATA box ژن UGT1A1 می باشد. تغییرات UGT1A1*36، UGT1A1*1، UGT1A1*28 و UGT1A1*37 به ترتیب با ۵، ۶، ۷ و ۸ تکرار TA پلی مورفیسم های شناخته شده در پروموتر ژن UGT1A1 هستند. افزایش تعداد تکرارهای TA با Gilbert’s syndrome و افزایش توکسیسیتی داروی Irinotecan در پاسخ به شیمی درمانی در ارتباط است. اساس عملکرد این محصول، روش مولکولی Fluorescent PCR با استفاده از DNA تخلیص شده از خون محیطی (Peripheral Blood) انسانی می ‎باشد.

اساس عملکرد محصول

محصول Trita® UGT1A1 Genotyping Kitبه منظور شناسایی تعداد تکرارهای TA در TATA box پروموتر ژن UGT1A1 طراحی و تولید شده است. این محصول قادر به شناسایی تعداد ۴ الی ۹ تکرار از توالی TA در TATA box ژن UGT1A1 می­باشد. الل­ های UGT1A1*36، UGT1A1*1، UGT1A1*28 و UGT1A1*37 به ترتیب با ۵، ۶، ۷ و ۸ تکرار TA پلی مورفیسم ­های شناخته شده در پروموتر ژن UGT1A1 هستند. نمونه بیولوژیک مورد نیاز جهت استفاده از این کیت، خون محیطی (Peripheral blood) انسانی می‎باشد. اساس عملکرد این محصول، روش مولکولی Fluorescent PCR می‎باشد. در این کیت، ناحیه‎ی ژنی مورد بررسی به گونه‎ای انتخاب شده است که تشخیص تعداد تکرارهای TA در TATA Box پروموتر ژن UGT1A1 را امکان پذیر می‎سازد. همچنین، انتخاب ناحیه ژنی قابل تکثیر و طراحی پرایمرها به صورت کاملا اختصاصی و با توجه به عدم وجود پلی‎مورفیسم در ناحیه اتصال پرایمرها روی ژنوم انجام گرفته است.

پس از انجام واکنش مولکولی PCR، محصول واکنش با یک ران Capillary electrophoresis در دستگاه ژنتیک آنالایزر قابل خوانش و شناسایی می‎باشد. پرایمرهای این محصول با رنگ فلورسنت F6-FAM^TM نشان‎دار شده‎اند. آنالیز و تفسیر نتایج نهایی با نرم افزار ®GeneMarker انجام می‎گیرد. به طور کلی، اساس عملکرد این محصول در تشخیص تعداد تکرارهای TA در TATA Box پروموتر ژن UGT1A1 شامل 3 مرحله اصلی زیر می‎باشد که هر مرحله به شرح زیر صحه گذاری شده است که عبارتند از:

1. استخراج DNA از نمونه بیولوژیک

این محصول با نمونه‎های خون محیطی (Peripheral blood) انسانی، صحه‎گذاری شده است. همچنین، این محصول با کیت‎ های استخراج DNA مانند کیت QIAamp® DNA Blood Mini Kit  محصول شرکت Qiagen آلمان برای نمونه‎های خون بهینه سازی شده است.

2. واکنش مولکولی Fluorescent PCR که شامل مراحل زیر است:

• دناتوراسیون (Denaturation)
• هیبریداسیون آغازگرهای نشاندار (Primer Hybridization)
• تکثیر مارکرهای ژنی موردنظر به روش PCR (PCR Amplification)

این محصول با دستگاه ترموسایکلر Applied Biosystem (Veriti) و BioRad (T 100) بهینه سازی شده است.

3. آنالیز قطعات تکثیر شده (Fragment Analysis) که شامل مراحل زیر است:

• جداسازی قطعات تکثیر شده (Fragment Seperation) به روش Capillary Electrophoresis
• آنالیز و تفسیر نتایج (Data Analysis) با استفاده از نرم افزار GeneMarker®

محصول PCR حاصل از این کیت با دستگاه Genetic Analyzer مدل‎های(xL)  ABI 3130 و ABI 3500 (xL) با کپیلاری در سایزهای 30، 50 یا 80 سانتی متر سازگار می‎باشد.  همچنین، آنالیز و تفسیر نتایج کپیلاری الکتروفورز با استفاده از نرم افزار ®GeneMarker بر اساس پنل کیت (که توسط شرکت برای کاربران ارسال می‎شود) امکان پذیر است.

محتویات کیت

محصول Trita® UGT1A1 Genotyping Kitدر سه مدل 25، 50 و 100 تستی قابل ارائه است. جدول زیر نشان دهنده‎ی اجزای کیت و مقادیر هر یک از آنها در مدل‎های مختلف این محصول می‎باشد.

ویژگی های فنی

در جدول زیر، مهم ترین ویژگی های فنی  محصول Trita® UGT1A1 Genotyping Kitبه طور خلاصه ارائه شده است: